الجامعات في أستراليا 
الجامعات في كندا 
الجامعات في ألمانيا 
الجامعات في ايرلندا 
الجامعات في الأردن 
الجامعات في نيوزلندا 
الجامعات في السعودية 
الجامعات في المملكة المتحدة 
الجامعات في الولايات المتحدة 
ملخص
تتكون الجلطات الدموية التي تسبب النوبات القلبية والسكتات الدماغية من الفيبرين والصفائح الدموية وخلايا الدم الحمراء. ومع ذلك، يتم دمج خلايا الدم البيضاء أيضًا في الجلطة، ودورها في بنية الجلطة واستقرارها غير مفهوم جيدًا. العدلات هي نوع من الخلايا البيضاء المشاركة في المناعة الفطرية وتكون قادرة على إفراز عدد من البروتياز مثل الإيلاستاز المعروف بتحلل الفيبرين. علاوة على ذلك، أظهرت الدراسات الحديثة أن العدلات قادرة على قذف الحمض النووي والهستونات الخاصة بها، مما ينتج شبكة ليفية خارج الخلية تحبس البكتيريا ومسببات الأمراض (مصائد العدلات خارج الخلية أو NETs). لقد تورطت الصفائح الدموية في تكوين الـ NETs وتم العثور على الـ NETs في الجلطات الدموية الشريانية والوريدية.
الوصف الكاملفي الوقت الحالي، ليس من المعروف تمامًا كيف تتفاعل هذه الشبكات مع شبكة الفيبرين وكيف تؤثر هذه الشبكات على تكوين الجلطة ووظيفتها واستقرارها. علاوة على ذلك، أظهرت الدراسات الحديثة أن الفيبرين يتفاعل مع خلايا الدم الحمراء عبر مستقبل الإنتغرين b3، ومع الصفائح الدموية عبر مستقبلات a2bb3 وGPVI. يرتبط الفيبرين أيضًا بالخلايا البطانية عبر مستقبلات الإنتغرين. من غير المعروف ما إذا كان الفيبرين يرتبط أيضًا بالعدلات، ولكن من المعروف أن الفيبرين يتفاعل مع الـ NETs (Longstaff C, JBC 2013). سيركز هذا المشروع على 1) تفاعل العدلات مع الفيبرين وعواقب هذا التفاعل على تكوين الجلطة واستقرارها، 2) دور الشبكات في تنظيم خصائص الليفين المرنة ومقاومة انحلال الفيبرين، و3) التحقيق في كيفية دمج الشبكات في شبكة الجلطات في الجسم الحي.
الفرضية:
يؤدي تنشيط العدلات في المنطقة المجاورة لتكوين الفيبرين إلى دمج الشبكات في شبكة الفيبرين، مما يؤدي إلى بنية جلطة أكثر كثافة، وزيادة تصلب الجلطة، وتقليل الخصائص المرنة للجلطة، وزيادة مقاومة الجلطة لانحلال الفيبرين، وتفاقم حالة تجلط الدم.
الأهداف:
يوفر دور العدلات والشبكيات في تجلط الدم رابطًا مهمًا بين الالتهاب وتخثر الدم ولكن لا يزال فهمه ضعيفًا حتى الآن. سيوضح مشروع الدكتوراه هذا دور العدلات والشبكات في تكوين الجلطة، وقد يؤدي إلى تحديد أهداف علاجية جديدة لعلاج تجلط الدم.
خطة التحقيق:
ستركز خطة البحث على 3 أهداف رئيسية: 1) تفاعل العدلات مع الفيبرين وعواقب هذا التفاعل على تكوين الجلطة واستقرارها، 2) دور الشبكات في تنظيم خصائص الليفين المرنة ومقاومة انحلال الفيبرين، و3) التحقيق في كيفية دمج الشبكات في شبكة الجلطات في الجسم الحي.
سيتم الحصول على العدلات من الدم باستخدام طرق الطرد المركزي ذات التدرج القياسي للكثافة. سيتم دراسة تفاعلات العدلات مع الفيبرين (المولد) على مستوى تفاعل جزيء واحد بواسطة التحليل الطيفي لقوة AFM. سوف يقترن الفيبرينوجين بنصائح AFM باستخدام طرق اقتران الأمين كما هو موضح سابقًا (Carvalho FA، ACS Nano 2010) ويستخدم لفحص العدلات المغسولة. سنقوم أيضًا بدراسة تفاعلات الفيبرينوجين المتعادلة مع الملقط البصري الذي تم تركيبه مؤخرًا في مختبرنا. في بعض التجارب، سيتم تحويل الفيبرينوجين إلى الفيبرين عن طريق غمر طرفه بالثرومبين. بالإضافة إلى ذلك، سيتم تنشيط العدلات باستخدام C5a أو LPS أو PMA قبل فحص ارتباط الفيبرين (المولد). سيتم فحص حركية الارتباط باستخدام فحوصات ربط اللوحة.
سيتم دراسة دور الشبكات في تنظيم خصائص مرونة الجلطة (معامل يونج، G'، وظل الخسارة، G'') باستخدام الملقط المغناطيسي. سيتم تصنيع جلطات الفيبرين من الفيبرينوجين ومن البلازما في وجود العدلات المحفزة من PMA للحث على تكوين الشبكات. سيتم فحص صلابة الخثرة والخصائص اللزجة باستخدام الملقط المغناطيسي كما هو موضح سابقًا (Domingues M, Blood 2016; Allan P, JTH 2012). سيقوم المرشح أيضًا بتحليل تأثيرات الشبكات على بنية الفيبرين داخل الليفي لمعرفة ما إذا كانت الشبكات تؤثر على تعبئة البروتوفيبريل للألياف أو ما إذا كانت الشبكات تتكامل مع الفيبرين على مستوى الألياف. سيتم فحص البنية داخل الليفي باستخدام تحليل قياس العكر لتعبئة البروتوفيبريل والمجهر الإلكتروني عالي الدقة لمسح المجال البارد كما هو موضح سابقًا (Domingues M، Blood 2016). سيتم دراسة التأثيرات على بنية شبكة الجلطة الشاملة عن طريق الفحص المجهري متحد البؤر وتحليل التخلل. وأخيرًا، سيتم دراسة معدلات انحلال الفيبرين بواسطة tPA والبلازمينوجين باستخدام الفحص المجهري متحد البؤر القياسي وقياسات التعكر.
سيتم دراسة دور تفاعل الـ NETs مع الفيبرين أثناء تجلط الدم في الجسم الحي باستخدام نماذج الفئران لتجلط الدم (Duval C, ATVB 2016). سيقوم المرشح بتطوير نموذج جديد لتجلط تدفق الدم المحدود استنادًا إلى ربط الوريد الأجوف الفأري، والذي ثبت سابقًا أنه يحفز تجلط الدم وترسب الفيبرين المصحوب بالتهاب وتسمم الدم (Brill A, JTH 2012). سيتم كشف الوريد الأجوف الفئران من خلال التشريح تحت التخدير العام. سيتم وضع الأربطة حول الوريد الأجوف، باستخدام إبرة تحت الجلد ذات قطر صغير كفاصل. ستتم إزالة المباعد ويحدث التجلط الناتج خلال 3-5 أيام بعد التدخل. سيتم التضحية بالحيوانات والحصول على الخثرات الدموية لتحليل الفيبرين والشبكات باستخدام التحليل الكيميائي المناعي. سنستكشف أيضًا استخدام الفحص المجهري للصفائح الضوئية لتصوير الجلطات الدموية في الـ NETs والفيبرين.
التدريب
سيتم تدريب المرشح في ليدز على الطرق المختبرية لتركيب ووظيفة الجلطة، بما في ذلك التعكر والتخلل والمسح المجهري متحد البؤر بالليزر والمجهر الإلكتروني الماسح. لدينا عدد من طاقم البحث (زملاء أبحاث ما بعد الدكتوراه وفنيي الأبحاث) الذين سيقدمون التدريب على هذه الأساليب. علاوة على ذلك، سيتم تدريب المرشح على التحليل الطيفي لقوة AFM، والملاقط المغناطيسية، وتحليل قياس العكر لتعبئة البروتوفيبريل. لدينا زميل أبحاث ما بعد الدكتوراه في الفيزياء الحيوية (الدكتور ستيفن بيكر) وطالب دكتوراه آخر على دراية جيدة بهذه الأساليب متعددة التخصصات وسيقدمان التدريب. لقد تم إعداد كل هذه الأساليب والخبرة متاحة محليًا. بالنسبة للمهارات داخل الجسم الحي، سيتم تدريب المرشح في ليدز، حيث قمنا بإعداد نماذج تجلط الدم في الفئران باستخدام FeCl3 وإصابة جدار الوعاء الدموي بالليزر، حيث يتم تحليل تكوين الخثرة بواسطة الفحص المجهري أثناء الحياة. في هذه المنحة، سنقوم بإنشاء نموذج جديد للتخثر الوريدي يعتمد على تقييد تدفق الدم في الوريد الأجوف عن طريق وضع الأربطة، مما يؤدي إلى تطور الخثرة الوريدية على مدار 3-5 أيام. لقد ثبت أن الشبكات جزء من الخثرة التي تلت ذلك في هذا النموذج.
التوافق مع الأبحاث الجارية حاليًا
يعد تجلط الدم سببًا رئيسيًا للوفاة في جميع أنحاء العالم، وتظهر الدراسات الحديثة الدور المهم لبنية الجلطة ووظيفتها في تحديد خطر تجلط الدم. تركز مجموعتنا على الآليات الجديدة التي تنظم بنية الجلطات واستقرارها بهدف تطوير تشخيصات وعلاجات جديدة (برنامج BHF بقيادة آرينز). ستعمل هذه المنحة على تعزيز التفاعلات الحالية وإنشاء رابط جديد بين الدراسات في الجسم الحي (Ariëns، Philippou) والفيزياء الجزيئية (Connell). ستجمع هذه المنحة بين مجال الخبرة في مجال تخثر الدم والتخثر (Ariëns، Philippou) مع مجال الفيزياء الحيوية النانوية (Connell).
ملاءمة مع الإستراتيجية الشاملة لأبحاث القلب والأوعية الدموية
تعد أمراض القلب والأوعية الدموية والتخثر أحد الأسباب الرئيسية للإعاقة والوفيات بين كبار السن في جميع أنحاء العالم. كبار السن معرضون بشكل خاص لخطر الإصابة بالسكتة الدماغية أو أمراض القلب أو تجلط الدم الوريدي. ومع ذلك، مع زيادة المعرفة بعمليات المرض والتقدم في العمليات الجراحية، يتحسن الإصلاح والتعافي من أمراض القلب والأوعية الدموية. يركز هذا المشروع البحثي على توضيح الآليات التي تربط الالتهاب بالتخثر والتي تحدد بنية ووظيفة الجلطة الدموية أو الخثرة. وستؤدي هذه المعرفة والخبرة إلى تقدم في التشخيص المبكر لأمراض القلب والأوعية الدموية وعلاجها، وتحسين عملية الشفاء من هذا المرض المدمر. علاجات تجلط الدم متاحة ولكن بها مشاكل. هناك خطر كبير لحدوث نزيف لدى المرضى الذين يتناولون مضادات التخثر، حتى مع استخدام مثبطات التخثر الفموية المباشرة الأحدث. علاوة على ذلك، فإن علاج السكتة الإقفارية باستخدام منشط البلازمينوجين النسيجي لتحلل جلطة الفيبرين يكون فعالاً فقط في نسبة من المرضى، لأسباب غير معروفة. قد يشير الفهم الأفضل لبنية جلطة الدم والآليات التي تربط الالتهاب بالتخثر إلى طرق جديدة مباشرة لعلاج تجلط الدم وزيادة الفعالية وتقليل الآثار الجانبية غير المرغوب فيها مثل النزيف.
المراجع
Fuchs TA, Brill A, Duerschmied D, Schatzberg D, Monestier M, Myers DD Jr, Wrobleski SK, Wakefield TW, Hartwig JH, Wagner DD. مصائد الحمض النووي خارج الخلية تعزز تجلط الدم. Proc Natl Acad Sci الولايات المتحدة الأمريكية. 2010 7 سبتمبر;107(36):15880-5.
Longstaff C، Varjú I، Sótonyi P، Szabó L، Krumrey M، Hoell A، Bóta A، Varga Z، Komorowicz E، Kolev K. الاستقرار الميكانيكي ومقاومة تحلل الفيبرين للجلطات التي تحتوي على الفيبرين والحمض النووي والهستونات. ي بيول كيم. 8 مارس 2013؛288(10):6946-56.
Brill A، Fuchs TA، Savchenko AS، Thomas GM، Martinod K، De Meyer SF، Bhandari AA، Wagner DD. تعمل مصائد العدلات خارج الخلية على تعزيز تجلط الأوردة العميقة في الفئران. ي ثرومب هيموست. يناير 2012;10(1):136-44.
Fuchs TA, Brill A, Wagner DD. تؤثر مصيدة العدلات خارج الخلية (NET) على تجلط الأوردة العميقة. تصلب الشرايين الخثرة الوعائية الوعائية بيول. 2012 أغسطس;32(8):1777-83.
Carvalho FA1, Connell S, Miltenberger-Miltenyi G, Pereira SV, Tavares A, Ariëns RA, Santos NC. التعرف الجزيئي المعتمد على القوة الذرية لمستقبلات الفيبرينوجين على كريات الدم الحمراء البشرية. ايه سي اس نانو. 24 أغسطس 2010؛4(8):4609-20.
Domingues MM, Macrae FL, Duvaإل سي، ماكفرسون إتش آر، بريدج كي آي، أجان آر إيه، ريدجر في سي، كونيل إس دي، فيليبو إتش، أريينس آر إيه. يؤثر الثرومبين والفبرينوجين γ على بنية الجلطة من خلال تأثيرات ملحوظة على البنية داخل الليفية والتعبئة الليفية الأولية. دم. 28 يناير 2016؛127(4):487-95.
Allan P, Uitte de Willige S, Abou-Saleh RH, Connell SD, Ariëns RA. الدليل على أن الفيبرينوجين γ يتداخل بشكل مباشر مع نمو البروتوفيبريل: الآثار المترتبة على بنية الفيبرين وتصلب الجلطة. ي ثرومب هيموست. 2012 يونيو;10(6):1072-80.
يؤثر متغير Duval C وAli M وChaudhry WW وRidger VC وAriëns RA وPhilippou H. Factor XIII A-subunit V34L على الارتباط التصالبي للخثرة في نموذج تجلط الدم في الفئران. تصلب الشرايين الخثرة الوعائية الوعائية بيول. 2016 فبراير;36(2):308-16.
Brill A، Fuchs TA، Savchenko AS، Thomas GM، Martinod K، De Meyer SF، Bhandari AA، Wagner DD. تعمل مصائد العدلات خارج الخلية على تعزيز تجلط الأوردة العميقة في الفئران. ي ثرومب هيموست. يناير 2012;10(1):136-44.