الجامعات في أستراليا 
الجامعات في كندا 
الجامعات في ألمانيا 
الجامعات في ايرلندا 
الجامعات في الأردن 
الجامعات في نيوزلندا 
الجامعات في السعودية 
الجامعات في المملكة المتحدة 
الجامعات في الولايات المتحدة 
ملخص
يرتبط انحلال نقص الفيبرين بزيادة خطر الإصابة بأمراض التخثر. يتميز مرض السكري بانحلال الفبرين ومستويات مرتفعة من مثبط منشط البلازمينوجين (PAI) -1 هي إحدى الآليات المتورطة. نحن نفترض أن تثبيط نشاط PAI-1 باستخدام منهجية جديدة يحسن انحلال الفيبرين في الحالات عالية الخطورة، بما في ذلك مرض السكري، وبالتالي يقلل من خطر تجلط الدم.
الوصف الكامللقد قمنا بتطوير مكتبة عرض العاثيات لبروتين سقالة يقيد اثنين من الببتيدات المتطابقة المتغيرة 9AA (> 3x1010 ببتيدات عشوائية)، لمحاكاة تكوين الأجسام المضادة، والتي يطلق عليها اسم Affimers. تتمتع هذه الأفيميرات بوزن جزيئي منخفض وقادرة على التفاعل مع البروتينات. سوف نستخدم مكتبة المكتبة العشوائية عالية التنوع لفحص مجلدات PAI-1 التي تستخدم نظام عرض الملتهمة. سيكون للمشروع ثلاثة أهداف رئيسية:
عزل عوامل ربط PAI-1 عالية الألفة وتمييز دورها في تعديل انحلال الفيبرين.
دراسة الارتباطات/الخصوصية الملزمة لأصحاب الاهتمامات وتحديد مواقع التفاعل.
إجراء دراسات أولية على الجسم الحي لتحديد دور الأفيميرز في النزيف والتخثر.
الهدف 1.
عزل عوامل ربط PAI-1 عالية الألفة وتحديد دورها في تعديل انحلال الفيبرين.
فحص أدوات ربط PAI-1. سيتم إجراء فحص مكتبة Affimers ضد PAI-1 المعطل وإثراء المجلدات عالية التقارب. سيتم اختيار ما مجموعه 250 نسخة وتسلسلها. سيتم استنساخ العناصر التابعة ذات التسلسلات المميزة لإنتاج البروتين على نطاق واسع.
التحليل الوظيفي للمؤيدين. وسيتم إجراء ذلك باستخدام فحوصات قياس العكر والتخثر باستخدام البلازما وأنظمة الدم الكاملة. سوف تقوم أنظمة البلازما بالتحقيق في دور الأفيميرز في تعديل انحلال الفيبرين في وجود بروتينات البلازما الأخرى، في حين أن الدم الكامل سوف يدرس التأثيرات المحتملة للخلايا. في البداية، سيتم استخدام عينات البلازما المجمعة ومقايسة قياس العكر عالية الإنتاجية التي تم التحقق منها لتحديد ارتباط PAI-1، مما يؤكد تعديل تحلل الجلطة. بعد ذلك، سيتم اختبار العينات الفردية من المراقبة الصحية والحالات السريرية المختلفة (أمراض القلب الإقفارية، بلازما السكري من النوع 1 والنوع 2؛ العدد = 40 في كل مجموعة)، لتحديد التباين بين الأفراد في الاستجابة في الحالات المختلفة. سيتم استكمال تجارب قياس العكر بواسطة المجهر متحد البؤر والإلكتروني لتصور الجلطة والتأكد من بقاء البنية فسيولوجية.
بعد تضييق نطاق الاهتمامات المتعلقة بـ Affimers، سيتم إجراء تجارب تكوين/تحلل الجلطة على الدم الكامل باستخدام قياس المرونة الدورانية على أفراد من Affimers بالإضافة إلى مجموعة من Affimers حسب الاقتضاء.
مجموعة اختبارية من Affimers. في حالة عدم ظهور أي من Affimers ذات الارتباط العالي أي تأثير على انحلال الفيبرين، وهو أمر غير مرجح، سيتم استخدام عدد من Affimers معًا لتحديد ما إذا كان هناك حاجة إلى أكثر من Affimer لمنع نشاط PAI-1 بشكل فعال.
الهدف 2.
دراسة الارتباطات/الخصوصية الملزمة لأصحاب الاهتمامات وتحديد مواقع التفاعل
فحوصات ملزمة. سيتم إجراء هذه باستخدام رنين البلازمون السطحي لتحديد التقارب الملزم لـ Afimer مع PAI-1 ودراسة معدلات الارتباط/التفكك. سيتم ربط PAI-1 بشريحة استشعار CM5 باستخدام كيمياء اقتران الأمين وسيتم تمرير Affimers على سطح PAI-1 مع ثوابت الربط المحسوبة باستخدام برنامج BIAeval. سيتم تكرار التجارب عن طريق شل حركة Affimers من الاهتمامات وتدفق PAI-1 على البروتين.
اسحب الاختبارات. سيتم إجراء ذلك للتحقيق في تفاعل Affimers محل الاهتمام مع PAI-1 في المحلول وللتأكد من أن هذا التفاعل محدد ولا يتضمن بروتينات البلازما الأخرى. سيتم إجراء التحسين باستخدام البروتينات النقية قبل استخدام عينات البلازما.
تحليل ميكروأري. سيتم إنشاء رقائق الببتيد المتداخلة من 15 ببتيد AA لـ PAI-1. ستتم إضافة العوامل المثيرة للاهتمام إلى رقائق الببتيد هذه وبعد الغسيل الشامل سيتم اكتشاف الارتباط باستخدام الجسم المضاد المضاد للـ Affimer المحتوي على بيوتينيل.
علم البلورات. سيتم استخدام هذا لدراسة مجمعات Affimers-PAI-1. ستساعد البيانات التي تم إنشاؤها على فهم التفاعلات الجزيئية التي تكمن وراء مواقع التفاعلات الخاصة باهتمامات Affiemrs مع PAI-1.
الهدف 3. إجراء دراسات أولية على الجسم الحي لتحديد دور الأفيميرات في النزيف والتخثر.
أظهر عملنا حتى الآن أن أكثر من 70% من الأفيميرات التي تعدل نشاط بروتين التخثر، بخلاف PAI-1، لها تأثيرات مماثلة في بلازما الإنسان والفأر. سوف يخضع المُثبتون ذوو الاهتمام ذو التأثير المتساوي في بلازما الإنسان والفأر لاختبارات في الجسم الحي. سيتم تخدير الفئران ووضع القنيات في الوريد الوداجي متبوعًا بحقن Affimers مختارة. متزامنذ، سيتم تشريح الأوعية الفخذية وتخثر الدم الناجم عن تطبيق ورق الترشيح المنقوع في كلوريد الحديديك لمدة 3 دقائق مع التقاط صور تسلسلية لتحديد حجم الخثرة. في مجموعة منفصلة من التجارب، سيتم قياس وقت نزيف الذيل في الحيوانات المخدرة بعد حقن الأفيمرز محل الاهتمام ببروتين السقالة فقط المستخدم كعنصر تحكم في جميع التجارب التي أجريت على الجسم الحي.
النتيجة:
يزداد خطر الإصابة بتجلط الشرايين لدى مرضى السكري ويظل التشخيص بعد نقص تروية الأوعية الدموية ضعيفًا على الرغم من التقدم في العلاج. يعد انحلال الفيبرين أحد الآليات المتورطة في زيادة خطر تجلط الدم في مرض السكري، والذي يتم التوسط فيه جزئيًا عن طريق ارتفاع مستويات PAI-1. باستخدام كل من الدراسات البشرية والحيوانية، يبحث العمل المقترح بشكل شامل في دور تثبيط PAI-1، باستخدام منهجية جديدة، في تعديل انحلال الفبرين، والذي قد يكون له آثار علاجية مستقبلية في حالات المخاطر العالية للأوعية الدموية.
المراجع:
Yarmolinsky J, Bordin Barbieri N, Weinmann T, Ziegelmann PK, Duncan BB, Inês Schmidt M. مثبط منشط البلازمينوجين -1 ومرض السكري من النوع 2: مراجعة منهجية وتحليل تلوي للدراسات الرصدية. ممثل العلوم. 2016 27 يناير;6:17714.
Kearney K, Tomlinson D, Smith K, Ajjan R. انحلال الهيبوفيبرين في مرض السكري: هدف علاجي لتقليل مخاطر الإصابة بأمراض القلب والأوعية الدموية. كارديوفاسك ديابيتول. 9 مارس 2017;16(1):34.
تيدي وآخرون. بروتينات Afimer عبارة عن كواشف تقارب متعددة الاستخدامات ومتجددة. إليفي. 2017، 27;6، المعلومات الشخصية: e24903.